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無細(xì)胞百日咳攻擊菌的制備及液氮保存方法分析

時(shí)間:2019-05-09 10:29來源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊: 次
【摘 要】為了制備無細(xì)胞百日咳效價(jià)測(cè)定用攻擊菌并用液氮進(jìn)行保存，對(duì)此方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用原代攻擊菌復(fù)蘇傳代后測(cè)定細(xì)菌濃度，并用蛋白胨水稀釋為27億個(gè)菌/ml，分裝凍存管中。放入液氮罐內(nèi)，并對(duì)液氮保存的攻擊菌進(jìn)行相應(yīng)的檢測(cè)，用統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算。結(jié)果顯示，此方法制備的攻擊菌與傳統(tǒng)的攻擊菌無顯著性差異，凍后雖攻擊菌的毒力有所下降，但都在100～1000/MLD的正常范圍內(nèi)，且凍后0、3、6、9、12月無顯著性差異。同批支間差異小，CV<5% 。通過此方法制備的攻擊菌穩(wěn)定性好，試驗(yàn)結(jié)果符合《中華人民共和國(guó)藥典》要求，可用于無細(xì)胞百日咳的效價(jià)測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】無細(xì)胞百日咳攻擊菌；液氮保存；方法分析  自增壓液氮罐

作為無細(xì)胞百日咳效價(jià)測(cè)定攻擊用的菌種，長(zhǎng)期以來都是每次試驗(yàn)前現(xiàn)開菌種的方式，這樣既麻煩，又浪費(fèi)菌種，還有可能造成批間的效力試驗(yàn)差異很大。甚至可能因攻擊菌不成立，導(dǎo)致試驗(yàn)失敗。這樣浪費(fèi)動(dòng)物、人力、時(shí)間。

為此，實(shí)驗(yàn)用事先制備攻擊菌低溫保存的方法來解決這些問題。制備及保存微生物具有容易變異的特性，因此在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力，Mery-man（1956）曾引證在-130℃將無生化活性發(fā)生。據(jù)此可采用液氮保存攻擊菌。自增壓液氮罐
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