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氣相液氮運輸罐短期儲存胚胎的可行性研究材料和方法（下）

時間:2019-05-21 13:35來源: 作者:班德液氮罐 點擊: 次
1．6胚胎冷凍   自增壓液氮罐
采用玻璃化冷凍的方法。先將l mol／L的DMso在寶溫下平衡，DAP2 1 3和冷凍管(NuncCryoTllbe 1．0 lI】1)在O℃平衡。將要冷凍的胚胎移入1 mol／L的DMSO的液滴里，讓其自然沉到液滴底部，重復3次以盡可能地去除HTF。將5肛11 mol／L的DMSO和胚胎一同移入提前預冷的冷凍管中，O℃平衡5 s后，加入45 ul的DAP213，再在O℃平衡5s，將冷凍管裝到冷凍管夾直接投入液相液氮罐。第二天將冷凍管從液相液氮罐轉入到氣相液氮運輸罐，存放14 d后放回液相液氮罐。每種品系均留一個冷凍管的胚胎不放入氣相液氮運輸罐，作為對照。

1．7胚胎復蘇
將冷凍管從液相液氮罐中取出，倒出冷凍管里的液氮，在室溫卜．放置20s。加入37℃預熱的0．25Ino兒蔗糖0．9 rnl，迅速吸取注入10次，將蔗糖和胚胎移到培養(yǎng)皿里，再往冷凍管里加O．25 TI】ol／L蔗糖O．45 IIll，回收胚胎。將形態(tài)正常的胚胎在HTF里洗3次以充分吸取冷凍保護液，最后移入HTF液滴里培養(yǎng)，并計數(shù)。培養(yǎng)1 h后進行移植。

1．8移植
在移植前一天下午挑出8周齡以上發(fā)情期lcR小鼠與結扎的ICR雄性小鼠合籠。第二天挑出有陰栓的雌性小鼠做移植用。移植采用輸卵管移植。一般在移植后的第20天分娩，計數(shù)。

1．9統(tǒng)計方法
用卡方檢驗對兩組數(shù)據(jù)進行分析比較，P．<0．05為差異顯著。自增壓液氮罐
 
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