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液氮超低溫保藏法是菌種長(zhǎng)期保藏的最有效最可靠的方法

時(shí)間:2019-06-05 10:56來(lái)源: 作者:班德液氮罐 點(diǎn)擊: 次
怎么樣利用液氮保藏菌種?自增壓液氮罐

液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護(hù)劑的安瓶瓶?jī)?nèi)，將該安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌絲體處于-196℃，其代謝降低到完全停止的狀態(tài)。

所以不需定期移植。

液氮超低溫保藏法是菌種長(zhǎng)期保藏的最有效最可靠的方法。

具體操作如下：   

(1)菌種制備  菌種在PDA培養(yǎng)基平板上于22-24℃下培養(yǎng)10-15天，菌絲體充分生長(zhǎng)后，用打孔器(直徑2-4毫米)切割瓊脂塊，或用手術(shù)刀片把菌絲培養(yǎng)物切成2毫米X4毫米長(zhǎng)方形小塊。

(2)安瓶管制備  安瓶管的玻璃，要能經(jīng)受溫度突變而不破裂，容易用火焰熔封管口，恢復(fù)培養(yǎng)時(shí)容易打開(kāi)。一般采用硼硅玻璃，管的大小根據(jù)需要而定，通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液體的安瓶瓶比較合適。
選好安瓶管后，用印油書(shū)寫(xiě)欲保藏的食用菌菌種的菌號(hào)于管壁上，160℃干熱滅菌，使印記牢固地固定在管壁上。   

(3)保護(hù)劑  每管加進(jìn)0.8毫升高壓滅菌的10%的甘油水溶液或10%二甲亞諷水溶液可作為冷凍保護(hù)劑。
用無(wú)菌鑷子將這種帶有菌絲體的瓊脂塊移人加有保護(hù)劑的安瓶管中。用火焰將安瓶管上部熔封，浸在水中檢查有無(wú)漏氣。

(4)液氮保藏把已做好的安瓶菌種管放人具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一塊鐵片，使塑料瓶連同安瓶管能一起沉人液氮罐中)，蓋好瓶蓋，在瓶蓋上連接一條細(xì)繩并作記號(hào)，以便提出所需的菌種。把裝有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上，使安瓶管緩慢地降溫，大約30分鐘后，把安瓶管浸人液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。

啟用液氮罐中保存的菌種時(shí)，應(yīng)先將安瓶瓶置于35-40℃的溫水中，使瓶?jī)?nèi)的冰塊迅速融解，然后在無(wú)菌條件下開(kāi)啟安瓶瓶，用接種針取菌塊移接于適宜的培養(yǎng)基上，置22-24℃活化培養(yǎng)。自增壓液氮罐
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